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[求助] 培养基的pH会影响其倒平板后的硬度吗

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(Janny)

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发表于 2017-10-12 11:35 | 显示全部楼层 |阅读模式
本帖最后由 gsp1215 于 2017-10-12 15:09 编辑

最近在做一个方法验证,需要用到哥伦比亚基础培养基,配好后需要将pH调到5.1,然后121度10min灭菌,灭好后倒平板。实验是加0.1ml菌液在平板上涂布。然后发现平板很容易涂破,平板比较软,而且倒好的平板放冰箱时间越久越容易划破!想请教下大家,会不会是因为培养基酸度太大了?pH值对培养基本身的性状什么的有什么影响(不考虑功效)?如果我增加一定量的琼脂进去对培养基的功效会不会有影响呢?
非常感谢!!
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发表于 2017-10-12 11:45 | 显示全部楼层
pH应该不会培养基硬度,2%琼脂量应该都可以达到需要的硬度。制好的平板稍微放置一段时间再涂布,应该是不会破裂的。刚刚凝固就涂布力度控制不好有可能就会破裂
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发表于 2017-10-12 11:48 | 显示全部楼层
影响培养基硬度的是凝胶强度,主要还是琼脂的品质,至于pH值对琼脂的性能有没有影响这个就不清楚了;
在国标GB4789.28中5.1.2部分,关于培养基基础成分的要求上有说明,是可以根据实际需求对琼脂的使用量进行调整的。
4789.28.png
行动是缓解忧虑的良方,信仰则是幸福的基石!
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 楼主| 发表于 2017-10-12 12:10 | 显示全部楼层
StreamCHC 发表于 2017-10-12 11:45
pH应该不会培养基硬度,2%琼脂量应该都可以达到需要的硬度。制好的平板稍微放置一段时间再涂布,应该是不会 ...

平板制好有放置也会先吹干一些水分
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 楼主| 发表于 2017-10-12 12:17 | 显示全部楼层
威在天涯 发表于 2017-10-12 11:48
影响培养基硬度的是凝胶强度,主要还是琼脂的品质,至于pH值对琼脂的性能有没有影响这个就不清楚了;
在国 ...

非常感谢!培养基是那种现成的脱水培养基,按道理是应该凝胶强度够的,所以我额外增加怕有影响。这个培养基配过十几次 之前没有这样的情况,中间隔了一两个月没配,最近几次就会这样了
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发表于 2017-10-12 12:34 | 显示全部楼层
huanghuiying12 发表于 2017-10-12 12:17
非常感谢!培养基是那种现成的脱水培养基,按道理是应该凝胶强度够的,所以我额外增加怕有影响。这个培养 ...

一般预混好的干粉培养基是不需要再调节pH值的,只需要保证配制用水的品质即可。为什么还要再调节pH?。
还有就是,不要培养基凝固后立即使用;有可能你看到凝固了,实际培养基内部并没有凝固好,所以质地较软。
其它的建议:你可以检查下配制用水,检查下灭菌锅(灭菌温度控制,实际灭菌温度过高也会对强度造成影响)
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 楼主| 发表于 2017-10-13 09:16 | 显示全部楼层
威在天涯 发表于 2017-10-12 12:34
一般预混好的干粉培养基是不需要再调节pH值的,只需要保证配制用水的品质即可。为什么还要再调节pH?。
...

我这个是开发的新方法,因为产品的特殊性国标方法不适用,在验证的时候培养基都没有问题的,现在方法通过了正式常规使用了就出现问题!谢谢你,我再排除下各个因素先。。
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发表于 2017-10-13 09:36 | 显示全部楼层
pH值太低会影响琼脂凝固的,你可以自己买一瓶琼脂粉,做个简单的试验看;若是在强酸环境,培养基根本就凝固不了的
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 楼主| 发表于 2017-10-13 10:39 | 显示全部楼层
laoquan 发表于 2017-10-13 09:36
pH值太低会影响琼脂凝固的,你可以自己买一瓶琼脂粉,做个简单的试验看;若是在强酸环境,培养基根本就凝固 ...

嗯嗯 有道理 您有遇过这种情况吗
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