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[讨论] 常见微生物在常见选择性培养基上的菌落特征(图片已上传)

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发表于 2011-4-19 15:40 | 只看该作者 |只看大图 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
本帖最后由 首席大弟子 于 2011-4-20 16:08 编辑

微生物培养,在选择性分离培养基、显色培养基上的菌落特征,皆由微生物生长繁殖及代谢产物决定,培养基所含营养物质,皆为了满足微生物生长和代谢所需。

借由这次默克密理微生物达人眼力赛活动,我们是否一起在讨论分析一下我们经常接触到的这些菌落形态特征,也算是我们微生物版一次提高业务水平的学习机会,请大家一起来参与吧。

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 楼主| 发表于 2011-4-19 15:41 | 只看该作者
培养基简介:
培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素,用于各种微生物培养和鉴定。

一般基础培养基中含有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸膏、氯化钠、琼脂等基本营养万分。
一些选择、鉴定培养基根据用途不同,则需加入抑菌剂、指示剂、血液、糖等试剂,以利于需要菌的生长与鉴别。
一些需要使细菌大量生长、繁殖的培养基,主要成分多为氨基酸、核苷酸、无机盐、生长因子等。

琼脂是由石花菜或江篱(属红藻)中提取的一种藻胶,是由琼脂糖和琼胶质组成的长链多糖化合物。优点在于不能被细菌分解利用,在细菌培养的温度下凝胶强度稳定。

蛋白胨为动物蛋白经酶消化后产物,能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。

胰酪蛋白胨是一种优质蛋白胨,亦称胰酶消化酪蛋白胨或胰蛋白胨。系采用酪蛋白经胰酶消化后,浓缩干燥而成。可配制各种微生物培养基,用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定,以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。

牛肉浸膏是新鲜牛肉经剔除脂肪,消化过滤浓缩得到的一种营养物质,含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸、核苷酸、有机酸、矿物质及维生素的水溶性物质。主要作用是为了补充蛋白胨以及其他氮源的营养不足。
酵母粉富含B族维生素、有机氮以及碳水化合物等营养物质。

胆盐是胆酸钠盐,是从动物的胆汁中提取的一种混合物,含胆酸、结合胆酸以及胆汁醇等,胆盐用在培养基中是作为选择性抑制剂,主要抑制革兰氏阳性菌的生长。


培养基分类:

按营养物质可分为:
1、天然培养基:指一类利用动、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等。
2、组合培养基:又称为合成培养基或综合培养基,是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。如葡萄糖铵盐培养基、淀粉硝酸盐培养基等。
3、半组合培养基:一类主要以化学试剂配制,同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如,马铃薯蔗糖培养基。

按物理性状分:
1、液体培养基:一类呈液态的培养基
2、固体培养基:一类外观呈固态的培养基。根据性质又分为固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基、滤膜。
3、半固体培养基:指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态的培养基。
4、脱水培养基:又称预制干燥培养基,指含有除水分外的一切成分的商品培养基。

按功能性分为:
1、选择性培养基:一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基,具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能,广泛用于菌种筛选等领域。
2、鉴别培养基:一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。例如,伊红美蓝乳糖培养基(EMB)。
3、运输培养基
4、保存培养基
5、复苏培养基
6、增菌培养基
7、鉴定培养基
8、多用途培养基

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 楼主| 发表于 2011-4-19 15:42 | 只看该作者
培养基常用指示剂及变色范围

        指示剂              变色范围(pH)      颜色变化(酸~碱)
            麝香草酚蓝(酸域)         1.2~1.8                红~蓝
        甲基黄                  2.9~4.0                红~黄
        甲基橙                  3.1~4.4                红~黄
        溴酚蓝                  3.0~4.6                黄~紫
          溴甲酚绿                 4.0~5.0                黄~蓝
         甲基红                  4.4~6.2                红~黄
          石蕊                   4.5~8.3                红~蓝
         氯酚红                  4.8~6.4                黄~红
           溴甲酚紫                 5.2~6.8                黄~紫
            溴酚红                  5.2~7.0                黄~红
          溴麝香草酚蓝              6.0~7.6                黄~蓝
            中性红                  6.8~8.0               红~黄橙
             酚红                   6.8~8.4                黄~红
             甲酚红                  7.2~8.8                黄~红
           麝香草酚蓝(碱域)        8.0~9.6                黄~蓝
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 楼主| 发表于 2011-4-19 15:43 | 只看该作者

几种ISOGBSN常见选择性培养基及显色培养基的培养基配方及菌落特征分析:

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 楼主| 发表于 2011-4-19 15:43 | 只看该作者

一、大肠杆菌在结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA)上的菌落特征:

本帖最后由 首席大弟子 于 2011-4-20 21:50 编辑

大肠杆菌在结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA)上的菌落特征:

结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA):

蛋白胨
酵母粉
氯化钠
乳糖
胆盐
结晶紫
中性红
琼脂
pH7.4 ± 0.1      
7.0
3.0
5.0
10.0
1.5
0.002
0.03
15.0
25℃


原理:
       蛋白胨和酵母粉提供碳氮源和微量元素;乳糖是可发酵的糖类;氯化钠可维持均衡的渗透压;胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌,特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌;中性红为pH指示剂。


用法:
       称取本品 41.5g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,煮沸不要超过2 分钟。取适宜稀释度样品液1ml,加入到无菌平皿中心,将冷至  45 ± 0.5℃ 的  VRBA  10-15ml倾注于平皿中。小心旋转平皿将培养基与样液充分混匀。凝固后,再加 3-4ml  VRBA 覆盖 平板表层 ,翻转平板 ,置于  36 ± 1℃培养 18-24 小时。无需高压灭菌。临用时制备,不得超过 3 小时。


质量控制:
36±1℃培养18-24小时。
质控菌株菌株编号生长情况其它特征
金黄色葡萄球菌ATCC25923-/
大肠埃希氏菌ATCC25922+++紫红色菌落,周围有红色沉淀环
阴沟肠杆菌ATCC23355+++紫红色菌落,周围有红色沉淀环
沙门氏菌ATCC14028+++菌落无色透明



结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA)又称作肠道菌计数琼脂,根据SNFDA BAM方法,肠杆菌细菌在该培养基上可生成有或无沉淀环的粉红色至红色菌落,直径0.5mm,或更大。

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 楼主| 发表于 2011-4-19 15:44 | 只看该作者

二、沙门氏菌在木糖赖氨酸脱氧胆酸琼脂(XLD)上的菌落特征:

本帖最后由 首席大弟子 于 2011-4-20 21:52 编辑

沙门氏菌在木糖赖氨酸脱氧胆酸琼脂(XLD)上的菌落特征:

木糖赖氨酸脱氧胆酸琼脂(XLD):


配方:(g/L
酵母浸粉
L-赖氨酸
乳糖
蔗糖
木糖
氯化钠
硫代硫酸钠
柠檬酸铁铵
去氧胆酸钠
苯酚红
琼脂
pH7.4 ± 0.2      
3.0
5.0
7.5
7.5
3.75
5.0
6.8
0.8
2.5
0.08
15.0
25℃



原理:
       酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子; 氯化钠维持均衡的渗透压;木塘、乳糖、蔗糖为可发酵糖类,产酸使苯酚红指示剂变黄;去氧胆酸钠抑制革兰氏阳性菌,但不影响沙门氏菌的生长;硫代硫酸钠可被某些细菌还原硫化氢,与柠檬酸铁铵中的铁盐生成黑色硫化铁;琼脂是培养基的凝固剂;苯酚红为pH指示剂。



用法:
       称取本品 5.7g,加热搅拌溶解于 100ml 蒸馏水中,不要过分加热 , 冷至 50℃左右时,倾入无菌平皿,部分开盖干燥 2h,然后盖上,备用。无需高压灭菌。在 24小时内使用。



质量控制:
36±1℃培养18-24小时。
质控菌株菌株编号生长情况其它特征
金黄色葡萄球菌ATCC25923-/
大肠埃希氏菌ATCC25922+/-黄色菌落、有胆盐沉淀
沙门氏菌ATCC14028+++无色透明菌落,有黑色中心
福氏志贺氏菌ATCC12022+++无色透明菌落



木糖赖氨酸脱氧胆酸琼脂(XLD)中的酵母粉为细菌生长提供维生素和辅助因子,木糖、乳糖和蔗糖作为可发酵的碳源。除志贺菌外,其他大多数肠杆菌均发酵木糖,加入的赖氨酸是为了鉴别沙门氏菌。沙门发酵木糖产酸,形成酸性环境有利于该菌产生脱羧酶,从而使培养基的pH升高向碱性转变,但可因其他菌发酵乳糖和蔗糖产生大量的酸而中和,在碱性条件下,硫代硫酸钠及柠檬酸铁铵与沙门菌产生的硫代氢反应使菌落颜色呈黑色,酸性条件下下反应被抑制。酚红作为指示剂,NaCl维持培养基渗透压,去氧胆盐钠抑制一般革兰阳性菌生长,也可抑制大肠杆菌生长。。根据ISOGBFDA BAM方法,沙门菌在木糖赖氨酸脱氧胆酸琼脂(XLD)大多数可形成红色带黑心的菌落,约为2mm,光滑、湿润、边缘整齐,亚利桑那菌发酵乳糖,可形成带黑心的黄色菌落。


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 楼主| 发表于 2011-4-19 15:44 | 只看该作者

三、金黄色葡萄球菌在甘露醇高盐琼脂上的菌落特征:

本帖最后由 首席大弟子 于 2011-4-20 21:54 编辑

金黄色葡萄球菌在甘露醇高盐琼脂上的菌落特征:

甘露醇高盐琼脂:

配方:(g/L
蛋白胨
牛肉粉
D-甘露醇
氯化钠
酚红
琼脂
pH7.4 ± 0.2
10.0
1.0  
10.0
75.0
0.025
13.0
25℃


原理:
       蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子;D—甘露醇为可发酵糖类;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;酚红为pH指示剂。


用法:
        称取本品 109.0g,加入 1000ml 蒸馏水中,加热溶解并不停搅拌煮沸 1 分钟。121℃高压灭菌15 分钟,冷至 45-50℃左右时,倾入无菌平皿。


质量控制:
37℃培养18-24小时。
质控菌株ATCC生长情况菌落颜色
金黄色葡萄球菌25923+++黄色
大肠杆菌25922+/--
沙门氏菌14028+无色



甘露醇高盐琼脂中的NaCl能够抑制不耐盐的非葡萄球菌生长,D-甘露醇为碳源,酚红指示剂,凝固酶阳性菌能利用D-甘露醇产酸使酚红由红色变黄色。


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 楼主| 发表于 2011-4-19 15:45 | 只看该作者

四、产气荚膜梭菌在哥伦比亚血琼脂基础的菌落特征:

本帖最后由 首席大弟子 于 2011-4-20 16:02 编辑

产气荚膜梭菌在哥伦比亚血琼脂基础的菌落特征:

哥伦比亚血琼脂基础:


配方:(g/L
酪蛋白胰酶消化物
心胰酶消化物
玉米淀粉
肉胃酶消化物
酵母浸出粉
氯化钠
琼脂
PH
10.0g
3.0g
1.0g
5.0g
5.0g
5.0g
10.0g
7.3±0.2


原理:
       酪蛋白胰酶消化物、肉胃酶消化物、心胰酶消化物和酵母浸出粉提供碳氮源、维生素和氨基酸;淀粉能促进奈瑟氏菌的生长和增强链球菌的溶血特性;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。


用法:
        称取本品 39克,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,冷至45-50℃左右时,加入相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素,混匀,倾入无菌平皿。


质量控制:
30-35℃培养18-24小时。
质控菌株菌株编号生长情况其它特征
金黄色葡萄球菌ATCC 25923良好有黄色色素
单增李斯特氏菌ATCC 19114良好无色透明小菌落
大肠埃希氏菌ATCC 25922良好无色透明大菌落
沙门氏菌ATCC 14028良好无色大菌落
铜绿假单胞菌CMCC 10104良好有绿色色素



产气荚膜梭菌在血平板上多数有双层溶血环,内环完全溶血,是由于θ毒素的作用,外环不完全溶血是因为α毒素所致。


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 楼主| 发表于 2011-4-19 15:46 | 只看该作者

五、白色念珠菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上的菌落特征:

本帖最后由 首席大弟子 于 2011-4-20 21:56 编辑

白色念珠菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上的菌落特征:

马铃薯葡萄糖琼脂培养基:


配方:(g/L
马铃薯粉
葡萄糖
琼脂
pH5.6 ± 0.2      
6.0
20.0
20.0
25℃


原理:
       马铃薯浸出粉有助于各种霉菌的生长;葡萄糖提供能源;琼脂是培养基的凝固剂。


用法:
        称取本品  46.0g,加入 1000ml 蒸馏水中,115℃高压灭菌 20分钟,备用。灭菌好的培养基仅可重复加热熔化一次。


质量控制:
25-28℃培养48-96小时。
质控菌株菌株编号生长情况其它特征
黑曲霉菌ATCC1015+++白色菌落(有黑色孢子)
酵母菌ATCC18790+++白色菌落
白色念珠菌CMCC(F)98001+++白色菌落


白色念珠菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上的菌落特征为乳白色菌落,有突起,在加有氯霉素的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上,菌落表面呈奶油色。



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六、绿脓杆菌在十六烷三甲基溴化铵琼脂上的菌落特征:

本帖最后由 首席大弟子 于 2011-4-20 21:57 编辑

绿脓杆菌在十六烷三甲基溴化铵琼脂上的菌落特征:

十六烷三甲基溴化铵琼脂:


配方:(g/L
蛋白胨
氯化钠
牛肉浸出粉
溴化十六烷基三甲铵
琼脂
pH7.5 ± 0.1      
10.0
5.0
3.0
0.3
14.0
25℃


原理:
        蛋白胨和牛肉膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;十六烷三甲基溴化铵为选择性抑菌剂,作为一种季铵盐阳离子去污剂可释放细菌细胞中的氮和磷而抑制非绿脓杆菌的细菌;琼脂是培养基的凝固剂。


用法:
         称取本品 32.3g,煮沸溶解于1000ml纯化水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌 15 分钟,  备用。


质量控制:
36±1℃培养18-24小时。
质控菌株菌株编号生长情况其它特征
大肠埃希氏菌ATCC25922+/-/
铜绿假单胞菌CMCC10104+++有绿色色素


绿脓杆菌在十六烷三甲基溴化铵琼脂上,绿脓杆菌菌落扁平无定型,向周边扩散或略有蔓延趋势,菌落呈灰白色,周围有水溶性色素。


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七、单增李斯特在李斯特菌选择性琼脂上的菌落特征

本帖最后由 首席大弟子 于 2011-4-20 13:50 编辑

单增李斯特在李斯特菌选择性琼脂上的菌落特征

李斯特菌选择性琼脂:


配方:(g/L
胰蛋白胨
多价胨
牛肉粉
葡萄糖
氯化钠
磷酸氢二钠
甘氨酸
氯化锂
苯乙醇
琼脂
pH7.3 ± 0.1      
5.0
5.0
3.0
1.0
5.0
1.0
10.0
0.5
2.5
15.0
25℃


原理:
       胰蛋白胨、多价胨和牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖提供碳源;氯化钠维持均衡的渗透压;磷酸氢二钠为缓冲剂;甘氨酸、氯化锂、苯乙醇和复达欣可抑制非李斯特氏菌以外的部分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌;琼脂是培养基的凝固剂。


用法:
       称取本品 48g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶,每瓶 100ml,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至 50-55℃,每瓶加入 1 支复达欣(3mg),混匀,倾入无菌平皿备用。


质量控制:
35℃培养24-48小时。
质控菌株菌株编号生长情况其它特征
单增李斯特氏菌ATCC19114+++45℃斜射光蓝色菌落
英诺克李斯特氏菌ATCC33090+++45℃斜射光蓝色菌落
西尔李斯特氏菌
+++45℃斜射光蓝色菌落
金黄色葡萄球菌ATCC25923++/
大肠埃希氏菌ATCC25922-/


单增李斯特在李斯特菌选择性琼脂平板上,单核细胞增生李斯特菌培养后生成蓝色菌落,菌落周围有一不透明环。


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八、阪崎肠杆菌在阪崎肠杆菌显色培养基上的菌落特征:

本帖最后由 首席大弟子 于 2011-4-20 13:51 编辑

阪崎肠杆菌在阪崎肠杆菌显色培养基上的菌落特征:

阪崎肠杆菌显色培养基:



成份(g/L)

胰蛋白胨15.0  
大豆蛋白胨5.0
氯化钠5.0
柠檬酸铁铵1.0
硫代硫酸钠1.0
脱氧胆酸钠1.0
5--4--3-吲哚-α-D-吡喃葡糖甙0.1
琼脂15.0
pH 7.3±0.2  25℃


称取本品8.62g 加入200ml蒸馏水,加热煮沸完全溶解,121℃高压灭菌15min,冷至50℃左右时,倾入无菌平皿。

贮存

制备好的平板可保存2-5天,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处, 保存温度2-8℃,注意避光保存。

失效

干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。

操作步骤


1、用接种环接种mLST-Vm肉汤或EE肉汤增菌液10µl划线或涂布于阪崎肠杆菌显色平板上;

2、倒置放入培养箱36±1℃培养22-26h,典型的阪崎肠杆菌为蓝-绿色菌落;

3、挑取典型菌落做生化试验。

质量控制

1、外观

此干燥培养基的粉末均匀,具有良好的流动性,呈淡黄色或乳白色。制备好的平板呈淡黄色固体培养基。

2、微生物试验



                 在36±1℃培养22-26小时

质控菌株ATCC生长情况菌落颜色
阪崎肠杆菌29004+++-绿色
金黄色葡萄球菌25923--
沙门氏菌13076+++无色有黑色中心
大肠杆菌25922+++淡黄色
肺炎克雷伯氏菌10031+++无色


典型特征

典型的阪崎肠杆菌为蓝-绿色菌落,其它菌为无色、乳白色或黄色菌落。

阪崎肠杆菌生长代谢时产生葡萄糖苷酶,与培养基中经过酶切释放出显色基团,使菌体呈蓝绿色菌落。


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独沐秋风,看枫红落英
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