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雷老师雷老师,介绍下神奈川试验好吗

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发表于 2013-6-27 23:41 | 显示全部楼层 |阅读模式 |阅读模式
学过,但一直没具体操作过,雷老师给介绍一下吧,还想了解一下,神奈川试验的敏感性,需要和其他什么检测TDH的实验方法进行比较?



独沐秋风,看枫红落英
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发表于 2013-6-28 10:45 | 显示全部楼层
首席大姐,雷老师在实验室质量管理板块的
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 楼主| 发表于 2013-6-28 15:04 | 显示全部楼层
九日 发表于 2013-6-28 10:45
首席大姐,雷老师在实验室质量管理板块的

好吧,那俺也问下微生物版块上的党员专家拉
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发表于 2013-6-28 19:45 | 显示全部楼层
首席大弟子 发表于 2013-6-28 15:04
好吧,那俺也问下微生物版块上的党员专家拉



请微生物检测室的贾科长回答吧!!!!
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 楼主| 发表于 2013-6-28 23:26 | 显示全部楼层
leizhw 发表于 2013-6-28 19:45
请微生物检测室的贾科长回答吧!!!!

哎,好的,不过不认识贾科长啊,雷老师你帮我喊一声吧
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发表于 2013-6-28 23:31 | 显示全部楼层
首席大弟子 发表于 2013-6-28 23:26
哎,好的,不过不认识贾科长啊,雷老师你帮我喊一声吧

大弟子,有工作找你
http://bbs.foodmate.net/thread-680005-1-1.html
圣应堂玫瑰,国内第一家专为面点糕点糖果分类研发的鲜花馅料
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 楼主| 发表于 2013-6-29 07:09 | 显示全部楼层
白云爱上糖 发表于 2013-6-28 23:31
大弟子,有工作找你
http://bbs.foodmate.net/thread-680005-1-1.html

那个是找的实生习啊,你没看到许老师在喊他了吗
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发表于 2013-6-29 14:41 | 显示全部楼层
首席大弟子 发表于 2013-6-29 07:09
那个是找的实生习啊,你没看到许老师在喊他了吗

我感觉你也合适,和他PK一下
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发表于 2013-7-1 13:42 | 显示全部楼层
本帖最后由 leizhw 于 2013-7-1 13:47 编辑

1、http://bbs.foodmate.net/thread-413793-1-1.html已有一些讨论;
2、副溶血性弧菌有845个血清型,主要通过十三种耐热的菌体抗原(即O抗原)鉴定,而七种不耐热的包膜抗原(即K抗原)可以用来辅助鉴定。其致病力可用神奈川(kanagawa)试验来区分。该菌能使人或家兔的红细胞发生溶血,在琼脂培养基上出现β溶血带,称为“神奈川试验”阳性。神奈川试验阳性菌的感染能力强,多数毒性菌株为神奈川试验阳性(K+),多数非毒性菌株为神奈川试验阴性(Kˉ)。引起食物中毒的副溶血性弧菌90%神奈川试验阳性,通常在12h内出现症状。K+菌株能产生一种耐热型直接溶血素,Kˉ菌株能产生一种热敏型溶血素,而有些菌株能产生这两种溶血素。
3、神奈川试验之成功关键一定要有合格的我妻氏琼脂,我妻氏琼脂的合格关键是用生理盐水洗三次的新鲜人或兔血球(红细胞)。
4、根据iso 21872、 gb 4789.10、sn/t 0173,神奈川试验的敏感性,不需要和其他什么检测TDH的实验方法进行比较,然而其他什么检测TDH的实验方法所筛出的副溶血性弧菌,必须进行神奈川试验,来进一步确定食品安全或食品中毒流行病学分析。

知识角: 副溶血性弧菌的致病因子主要有溶血素、脲酶 ;其他与致病有关的致病因子也在研究中。

    1. 溶血素  副溶血性弧菌主要致病作用在于它可以产生多种溶血素 ,它们是耐热直接溶血素(thermostabledirecthemolysin,TDH )、耐热直接溶血素相关溶血素(TDH2relatedhemolysin,TRH )和不耐热溶血素(thermolabilehemolysin,TLH)。

    流行病学研究表明 ,临床上分离出的副溶血性弧菌几乎95%以上都会使特殊的我萋血琼脂培养基产生β溶血 , 被称为神奈川现 象(kangawa phenomenon,KP) 。Obara(1971) 从 KP 阳性的细菌培养滤液中分离到耐热性溶血素 ,该毒素是不含糖或脂质的蛋白质 ,由2 个相同的亚单位组成 ,由 165 个氨基酸残基组成 ,相对分子质量(Mr) 为 42 ×103 ,此种溶血素在100 ℃、10min仍保持活性 ,并在加入卵磷脂后不能增强其溶血活性 ,表明是直接作用于红细胞 ,故称为 TDH。TDH 由tdh基因编码 ,TDH阳性株含有 2 个 tdh 基因 ,即 tdh1 和 tdh2。tdh1 和 tdh2编码的 TDH仅有7 个氨基酸不同 ,典型的 KP+分离株的2 种基因拷贝有97.2%同源 ,其溶血活性相同 ,抗原性有交叉 ,不能区分 ,经 Edman 降解法得到的蛋白质序列比较发现 KP+ 株 tdh2 具有表达优势。

    Nishibuchi 等 从马尔代夫旅游腹泻患者排泄物中分离到1 批 KP-的副溶血性弧菌 ,表明副溶血性弧菌除溶血素 TDH外 ,还有其他致病因子 ,从这些细菌培养滤液中分离到另外 1 种溶血素 ,它可以引起红细胞溶血 ,但不耐热 ,且引起溶血的敏感动物红细胞的种类与 TDH不同(对牛红细胞的溶血活性很高 ,对马红细胞无溶血活性),现命名为 TRH。1O%~15%临床分离株产生 TRH,这些分离株一般TDH阴性 ,TRH 在 60 ℃以上 10min 即可灭活 ,其Mr 为48 ×103 ,是由2 个 Mr 各为 23 ×103 的亚单位组成 ,TRH与 TDH的氨基酸序列有 7O%同源 ,编码这2 种毒素的基因 trh 和 tdh 的同源性为 68.1%,

    TRH与 TDH的抗原性有部分交叉 ,两者免疫原性相似。trh基因据其核酸序列的变化又可分为 2 个亚组:trhl 和 trh2 基因 ,两者同源性为 84%,分别编码蛋白 TRH1 和 TRH2。Kishishita 等 研究认为 ,trhl和trh2 序列的不同会影响其蛋白质的特性 ,trhl 的基因产物对人、鼠、羊和牛的红细胞均有溶血作用 ,而trh2 基因产物只对人和兔的红细胞有溶血活性且溶血活性相对较弱。

    TDH和 TRH具有直接溶血活性 ,可使多种红细胞发生溶血 ,溶血过程可以分为 2 步:首先 ,溶血素与宿主的红细胞膜结合 ,此过程呈温度依赖性并由受体介导 ,主要是神经节苷脂-2 (GM2),GM1 也参与信号介导;而后 ,在红细胞膜表面成孔并最终导致红细胞胶样渗透溶解 ,此过程也呈温度依赖性。兔、狗、豚鼠和人类的红细胞对 TDH较敏感。TDH还具有肠毒素活性和细胞毒活性 ,在兔动物模型中可导致肠液积聚和肠道氯化物的外排。TDH 还引起人类腹泻 ,其致病机制主要是 ,TDH 被认为是一种孔蛋白 ,可使细胞膜上形成小孔通道 ,引起细胞外Ca2+ 浓度增加 ,从而引起Ca2+ 激活的Cl-通道开放 ,Cl- 分泌增加。当 TDH引起的这种细胞渗透压的改变超过细胞的代偿调节能力 ,将使细胞发生病理和形态学改变 ,导致细胞膨胀甚至死亡。TDH还具有心脏毒性和致死作用。

    近年来的研究发现 ,副溶血性弧菌除了产生TDH和 TRH溶血素外 ,还可产生另 1 种溶血素 ,即TLH。Hatsumit 等 于1985 年研究发现无论是临床

    分离株还是环境分离株都含有tlh基因 ,并具有种的特异性 ,生化试验表明 TLH 是一种非典型的磷脂酶 ,需要卵磷脂的存在才具有溶血活性 ,但其功能和致病性仍不十分清楚。TLH由tlh基因编码 ,国外已报道了编码 TLH的基因序列 ,tlh 位于染色体上 ,长约1.3kb。李志峰等 对 tlh 基因进行克隆和序列分析 ,显示 TLH 作为特异性诊断靶抗原 ,具有潜在的应用价值。

    2. 脲酶  大量研究发现 ,脲酶(Ure)与副溶血性弧菌的致病性存在一定关系。Iida 等 通过基因组分析发现 ,Ure 由Ure 基因簇编码 ,Ure+菌与 TRH之间呈正相关性。Ure 和 trh 基因都位于小的复制子上 ,且两者的基因序列位于染色体DNA 相邻的编码区 ,利用长距和精确聚合酶链反应(PCR)测得 ure 和trh基因之间的距离小于 8.5kb。研究还表明 ,在尿素缺乏时 ,副溶血性弧菌Ure 的表达活性极低 ,只达1%,当有尿素作为介质时 ,其活性可提高 100 倍。综合以上因素 ,很多学者认为 Ure 可以作为快速检测副溶血性弧菌 ,尤其是 KP- 菌的一个生物学标志。Okuda 等 对 1979~1995 年从美国西海岸分离的Ure+ 和 Ure- 副溶血弧菌进行检测 ,结果表明60 株为 Ure+ 株 ,59 株(98%) 携带 trh (trhl 和/或trh2) ,54 株(90%) 携带 tdh;25 株为 Ure-株 ,20 株 (80%) 携带tdh,但无1 株携带trh基因。

    3. 其他致病因子  通过兔肠绒毛上皮黏附试验 ,对副溶血性弧菌的黏附机制进行研究 ,证明菌毛与该菌的黏附作用有关 。很多实验证实副溶血性弧菌具有侵袭力 ,并且证实侵袭力是其毒力的一部分。Akeda 等 通过药敏试验 ,发现副溶血性弧菌对 Caco22 细胞产生侵袭作用 ,而细胞松弛素D、诺考达唑能阻断副溶血性弧菌 AQ4023 对 Caco22 细胞的侵袭力 ,这也表明酪氨酸蛋白激酶介导的信号转导、鞭毛和细胞骨架可能在侵袭过程中发挥一定作用。Wang等 发现甲基转移酶基因位于副溶血性弧菌的22.79kb致病岛 ,它的存在与弧菌的毒力因子的相关性超过98%。


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 楼主| 发表于 2013-7-5 23:36 | 显示全部楼层
leizhw 发表于 2013-7-1 13:42
1、http://bbs.foodmate.net/thread-413793-1-1.html已有一些讨论;
2、副溶血性弧菌有845个血清型,主要通 ...

雷老师,贾老师你咋没找来啊
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发表于 2014-1-13 08:06 | 显示全部楼层
昨天去参加一个学习班了,是福建疾控中心的马老师讲的,你去了么?首席大弟子,好多疾控中心的人去了,在南京,他略微提了一下神奈川,就是一个溶血实验,在特定条件下某些溶血不好的,用这个做起来效果会好点。但有一定的缺陷性。
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发表于 2015-2-13 13:39 | 显示全部楼层
好久不见楼主了
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