幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡和萎缩性胃炎的重要病因之一，并与胃癌、胃淋巴瘤的发生密切相关，其中人群中的感染率超过50％，目前已被世界卫生组织列为一级致癌因子〔1〕。Hp的致癌因子包括：尿素酶、脂多糖、热休克蛋白、磷脂酶和空泡毒素(vacuolatingcytotoxin，VacA)等。其中VacA蛋白仅有部分菌株产生，可引起上皮细胞出现空泡样变及胃粘膜病变。为了解重庆地区HpVacA＋株的感染与不同消化道疾病的关系，我们采用ELISA法和细胞培养法，检测了本校西南医院消化科住院患者HpVacA＋株感染的情况。

　　1　材料和方法

　　1.1材料Hella细胞与Hp标准产毒株为本室保存。包被用VacA为本室基因工程表达产物。MeM细胞培养液为Gibico公司产品。辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG(HRP羊抗人IgG)购自华美公司。酶标仪为Beckman公司产品。

　　1.2方法

　　1.2.1Hp菌的分离培养取消化病患者的胃粘膜标本48人份，并同时抽取外周血分离Hp菌。首次分离时，采用牛心、脑浸液固体培养基，于微需氧条件下37℃培养48h，做革兰氏染色观察形态，并做尿素酶、氧化酶和过氧化氢酶试验鉴定Hp菌。常规分离血清，置20℃冻存待用。

　　1.2.2Hp菌VacA的活性检测①分离Hp菌及VacA的收集，参照文献〔2〕进行。②用MeM细胞培养液(含150mL/L小牛血清和100kU/L青、链霉素双抗)，于37℃70mL/LCO2条件下培养Hella细胞，至计算数达108/L以上。加于96孔细胞培养板中，每孔100μL，并加入100μLVacA，于37℃70mL/LCO2条件下培养18～24h。每份样品做倍比稀释(1∶10，1∶20～1∶160)，每个稀释度测定2次。空白对照孔中加入100μLHp液体培养基上清代替Hp菌培养物的超滤上清。于光镜下计数Hella细胞的空泡样变，细胞空泡形成≥50％者判为阳性。

　　1.2.3外周血清中抗VacA抗体的检测采用ELISA夹心法，操作步骤及结果判定均按照文献〔3〕进行。简要过程是：以基因工程制备的VacA蛋白包被酶标板(100mg/L)，依次用牛血清白蛋白封闭，加入Hp感染患者的血清和HRP羊抗人IgG，用OPD显色后，检测A405nm值。结果判定：测试孔A405nm值－空白孔A405nm值/阴性对照孔A405nm值－空白孔A405nm值≥2.1者判为阳性。另将Hp产毒标准株超声粉碎后，以12000×g40℃离心20min。取上清包被作为阳性对照，以VacA稀释液包被作为阴性对照。