微生物保藏方法之液体石蜡保藏法

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6.3 适用范围 本方法适用于不能分解液体石蜡的酵母菌、某些细菌(如芽孢杆菌属，醋酸杆菌属等)和某些丝状真菌(如青霉属，曲霉属等)。
       6.4 原理 液体石蜡保藏法可作为定期移植保藏法的辅助方法。在液体石蜡覆盖下，菌种的生物代谢受到抑制，细胞老化被推迟。此方法可阻止氧气进入，使好气菌不能继续生长，也可防止因培养基的水分蒸发而引起的菌体死亡，达到延长菌种保藏时间的目的。
       6.5 技术要求 菌种培养参照附录A。 应选用优质化学纯液体石蜡。 液体石蜡易燃，在对液体石蜡保藏菌种进行操作时注意防止火灾。 保藏场所应保持干燥，防止棉塞污染。 保藏期间应定期检查，如培养基露出液面，应及时补充灭菌的液体石蜡。
       6.6 方法与步骤液体石蜡 将液体石蜡分装加棉塞，用牛皮纸包好，0.1MPa灭菌30分钟取出，置40℃恒温箱蒸发水分，经无菌检查后备用。斜面培养物的制备

                        斜面宜短，不超过试管三分之一为宜。
                        灌注石蜡 无菌条件下将灭菌的液体石蜡注入刚培养好的斜面培养物上，液面高出
                        斜面顶部1厘米左右，使菌体与空气隔绝。
                        保藏 将注入石蜡油的菌种斜面直立存放于低温(4℃-15℃)干燥处，保藏时间
                        为2-10年不等。
                        恢复培养 恢复培养时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，
                        再重新转接一次。