浅谈高效液相色谱和超高效液相色谱的差异

王中泰

浅谈高效液相色谱和超高效液相色谱的差异

相信有实验经验的小伙伴都知道，高效液相色谱(HPLC)和超高效液相色谱(UPLC)是实验室常用的组分分离技术。鉴于他们有共同功能，许多小伙伴可能很难区分这两者。下面将通过浅谈HPLC和UPLC的区别来带领小伙伴们简单了解两者的差异。

1、高效液相色谱定义

高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

2、超高效液相色谱定义

超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）借助于HPLC（高效液相色谱）的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。

3、高效液相色谱法的原理与高效液相色谱法

基本相同，所改变的地方有以下几点：

1）小颗粒、高性能微粒固定相的出现。 高效液相色谱的色谱柱，例如常见的十八烷基硅胶键合柱，它的粒径是5μm或者3μm，而超高效液相色谱的色谱柱会达到1.8μm，甚至1.7μm。这样的粒径更加利于物质分离。

2）超高压输液泵的使用。由于使用的色谱柱粒径减小，使用时所产生的压力也自然成倍增大。故液相色谱的输液泵也相应改变成超高压的输液泵。

3）使用低扩散、低交叉污染自动进样器。配备了针内进样探头和压力辅助进样技术。

4）高速采样速度的灵敏检测器。

5）仪器整体系统优化设计。色谱工作站配备了多种软件平台，实现超高效液相分析方法与高效液相分析方法的自动转换。

与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本。

不过由于实验过程中仪器内部压力过大，也会产生相对应的问题。例如泵的使用寿命会相对降低，仪器的连接部位老化速度加快，包括单向阀等部位零件容易出现问题等。

4、应用

由于其更高的灵敏度，UPLC可以用于更复杂的样品，并且这些样品中各种成分的量可能更少。一些例子包括膳食补充剂和生物样本。另一方面，高效液相色谱用于相对更简单的应用，例如水的净化和药物中杂质的检测。