将反相C18用到极致

王中泰

将反相C18用到极致

在液相色谱中，反相色谱的应用占到80%以上，而反相色谱中，C18的应用估计也能占到80%以上。



C18使用注意事项：
常规C18的使用，不能用纯水相洗脱，流动相中至少含有3%有机相，否则会发生C18键合相疏水塌陷，造成色谱柱没有保留能力。疏水塌陷后可用有机相再将疏水C18链展开。



下面（a）图显示长链是舒展开的；（b）图显示为长链疏水塌陷。

图片参考文献【1】


在pH限定范围内使用，常规C18的pH耐受2-6，特殊键合的C18（有机杂化）可耐受pH1-12，但还是不建议长时间保存在极端pH环境中。
柱温一般不超过50℃，最高不超过60℃。

水相使用超纯水或蒸馏水，有机相试剂使用色谱纯以上级别。
缓冲盐流动相应过0.45µm滤膜后使用。

用缓冲盐，有机相比例不能超过75%(具体看盐浓度和盐的溶解性)，完成实验后用高比例水相置换掉缓冲盐，再换高比例有机相冲洗色谱柱。

C18色谱柱冲洗：
没有用缓冲盐，直接用甲醇或乙腈冲洗10个柱体积后保存；
用了缓冲盐，先用95%水甲醇冲洗10个柱体积，再用甲醇冲洗10个柱体积后保存；

冲洗小极性杂质：完成上述a或者b后再用二氯甲烷冲洗10个柱体机，然后置换成甲醇或乙腈。
大极性样品难保留时，可选用亲水C18，并用纯水相洗脱，以延长驻留时间，甚至可以双柱串联。

小极性样品难洗脱时，用乙腈搭配乙醇洗脱，或乙腈搭配二氯甲烷等洗脱。
为了延长C18柱的寿命，最好专柱专用，尤其是酸碱性条件不能频繁切换。

参考文献：[1] Przybyciel, M. & Majors, Ronald. (2002). Phase Collapse in Reversed-Phase LC. LC-GC Eur. 15. 15. 1-5.