反相色谱中填料的选择

王中泰

反相色谱中填料的选择

在液相色谱分析中，反相色谱的应用占据80%以上，反相色谱的填料类型也是非常多的。

反相色谱的填料种类包括：C18，C12，C8，苯己基，醚联苯基，C5，C4，C1，还有键合相不同修饰的、特殊处理的，比如亲水的、耐受宽pH的，还有基球粒径不同的、孔径差异的、碳含量多少的等等。
我们了解到这么多种类的反相填料，具体到实际应用中，该如何去选择呢？

我们首先看待分析物质的分子量大小，或者大分子的分子直径。分子量大于5000的，我们要选择填料孔径大于150Å，大于10000的选择300Å。

我们再根据分析物的极性大小，比如极性特别大，常规C18保留不住，我们可以尝试高碳含量的C18，长柱长的，甚至可以两支色谱柱串联使用，降低流速，以增加分析物在色谱柱内的分离时间，还可以选择亲水C18，用纯水相去洗脱。如果分析物极性特别小，比如油脂类、或疏水性大分子，我们可以选择C8或者C4。

若分析物结构上有多个苯环，尤其了解到分析物各组分结构上有π-π相互作用差异的，可以选择苯己基、醚联苯基或五氟苯基等。
如果样品中组分复杂，很难分离，可以选择小粒径填料，来提高分辨率。

我们对已知样品酸碱性，或者尝试分析发现峰型难看的，一般会将流动相调为低pH或高pH，这时要选择有机杂化的填料，可耐受酸碱pH更宽。

有关液相色谱的问题，欢迎大家探讨。