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氨基酸标准的选择
1.首先确定的实验目的以及需要测定的品种 如果是要测定氨基酸含量,那么使用普通的氨基酸标准品就可以了。如果要进行氨基酸测序,最好使用衍生化的氨基酸标准品。
氨基酸及其衍生物,代谢物品种繁多,如果所有品种全部测定不仅繁琐,而且多数时候是没有必要的。一般来说最主要测定的品种是人体内的18种氨基酸(如下):
甘氨酸 (Gly)
亮氨酸(Leu)
蛋氨酸 (Met)
酪氨酸 (Tyr)
组氨酸(His)
苏氨酸(Thr)
丙氨酸(Ala)
异亮氨酸 (Ile)
色氨酸(Try)
半胱氨酸 (Cys)
赖氨酸(Lyb)
天门冬氨酸(Asp)
缬氨酸(Val)
苯丙氨酸(Phe)
脯氨酸 (Pro)
丝氨酸 (Ser)
谷氨酸 (Glu)
精氨酸(Arg)
2.确定检测检测方法,有多种方法可以进行氨基酸的检测,现在国内常用的方法,含量测定主要是:氨基酸分析仪或HPLC;测序使用测序仪。
3.标准品的选择:如果只是测定一种或少数几种氨基酸时,使用单标就可以了。如果测定的氨基酸品种较多,或者测定任务繁重(样本很多),那么使用混标较为合适。
其中有很多客户在选择时会遇到一个问题:混标没有包含所有我所需要的氨基酸!
这可能是两方面造成的:
其一,混标生产厂家不可能将所有的氨基酸混标搭配都生产,只会选择一些大家都会经常使用的品种作为混标品种。
其二,碍于检测方法所限定。一般样本多为蛋白质或者多肽类物质,在测定前要水解成为氨基酸之后才能测定,所测样本都是经盐酸水解成为游离氨基酸后再进行测定,但是酸水解时会破坏色氨酸、胱氨酸、半胱氨酸等几种氨基酸。所经过酸水解的样本可以同时测定苏,丝,谷,脯,甘,丙,缬,蛋,异亮,亮,酪,苯丙,组,赖和精氨酸等16种氨基酸。需要测定酸水解会破坏的色氨酸、胱氨酸、半胱氨酸这些氨基酸时一般要对样本进行碱水解或者其他水解,再进行测定。所以一般测定步骤是样本先经酸水解后先测定不被酸分解的氨基酸,然后根据需要再测定酸会破坏的几种氨基酸。所以混标中酸会破坏的氨基酸一般是不会含有的,需要另行购买。
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