【2018实验室 】+氯霉素事件的成长

houguanglei

氯霉素事件的成长

某一次用氯霉素酶联免疫试剂盒做氯霉素实验的结果大部分为阳性，因为我们公司的产品不可能是这样的情况，所以自己反复思考实验操作以及试剂配制是否出现差错，猜想前处理吹干的过程可能有交叉污染，利用相同的样品重新做实验，经过验证的确是前处理交叉污染导致大多为阳性结果。

进而自己反思，重新学习。写这篇文章不仅是为了让小伙伴把我的操作作为前车之鉴，也是趁这个机会和大家交流相互学习。

之前，做实验都是机械重复，其实我们善于发现每次实验可以精进的方面，我们会发现其中的乐趣。做实验首先要理解原理，这样对于实验结果的理解很有帮助，而且大家一定认真阅读说明书以及注意事项，这样更能保证准确性。

一、氯霉素酶联免疫试剂盒原理：样品中的氯霉素与氯霉素酶结合物竞争结合酶标板孔中固相化的氯霉素特异性抗体，通过酶催化显色剂显色，根据显色的深浅来判断样品中氯霉素含量。显色深，含量少；显色浅，含量多。

二、我们公司产品为组织类，所以前处理方法如下：

（a）准确称取3±0.3g均质后的样品于50mL离心管中；

（b）加入6mL乙酸乙酯，充分涡旋1分钟

（c）摇床300rpm振摇10分钟

（d）4000g以上，离心10分钟

（e）取4毫升上层乙酸乙酯于新的离心管中

（f）50-60℃水浴中，氮气吹干

（g）加入2毫升正己烷，充分涡动10秒，再加入1毫升样品稀释液，低速涡动1分钟

（h）4000g以上，离心5分钟，完全弃去上层正己烷及中间层杂质

（i）取50ul进行检测

重点强调三点

1、该处理方法关键点在涡动，请务必保证涡动时间，否则直接影响检测结果。

2、（f）中的一个小仪器用空气吹即可（附图如下），为了防止交叉污染必须在吹前吹后用甲醇清洗氮吹针，打开仪器把针的三分之一浸入甲醇液体中5秒（可以用50毫升离心管装）。吹干后由于温度低底部有凝固也可进入下一步骤。

3、弃去正己烷后，如味道刺鼻可打开离心管口放放味道。

三、检测步骤需要注意事项：

1、每次做实验前先把空调调到25℃，做实验之前把酶标板和试剂提前拿出恢复到室温（25±2℃）。

2、各试剂在使用前请摇匀，混合时应避免出现气泡。

3、板孔中加入样品溶液、酶结合物工作液、AB混合液、终止液各步骤时间不得超过3分钟。

4、尽量减少酶标板上方空气流动。

5、点板时候移液枪使用吸2打1方法加试剂，尽量做双孔平行保证实验准确性。

6、为了我们实验员在操作准确情况下依旧出现问题有可以追溯的情况，小伙伴们做每批实验时记录试剂盒的批号。

为了写这篇文章，又认真的看了说明书，又发现了新的知识点，和大家共同学习！