如何搞定质谱调谐常见问题？

王中泰

如何搞定质谱调谐常见问题？

为了得到好的质谱数据，在进行样品分析前应对质谱仪的参数进行优化，这个过程就是质谱仪的调谐。调谐是质谱使用中非常重要的一环，今天咱们就聊一聊调谐操作。

调谐这个词来源于模拟电路。电路中，调节L或C使其谐振的过程，叫做调谐。
在质谱中，射频电源(RF)含有线圈，相当于电感L；质量分析器相当于电容C。
在质谱出产前，实际上要调节射频电源(RF)的线圈，使得线圈和质量分析器组成LC电路达到谐振。这个过程就是最初的调谐。后来将调谐的概念拓展为调谐质谱的多个参数，使其达到最佳工作状态。

调谐中将设定离子源部件的电压；设定amu gain和amu off值以得到正确的峰宽；设定电子倍增器（EM）电压保证适当的峰强度；设定质量轴保证正确的质量分配。

调谐包括自动调谐和手动调谐两类方式，自动调谐中包括：自动调谐、标准谱图调谐、快速调谐等方式。如果分析结果将进行谱库检索，一般先进行自动调谐，然后进行标准谱图调谐，以保证谱库检索的可靠性。

一、调谐液
通常一般的调谐用PFTBA（全氟三丁胺）。还有高质量低质量调谐的特殊（目标）调谐。全氟三丁胺 (PFTBA) 放在紧靠着真空室下面的标样小瓶内。

当一开始调谐时，PFTBA 自动进入离子源内。通常 PFTBA 使用一年或更长的时间才需要更换。这种化合物的稳定性为再现调谐提供了必要的条件。同样，这种化合物具有足够的挥发性使其进入离子源，而不需要加热。PFTBA 碎片离子质量数覆盖了很宽的质量范围，并且由于只有 C-13 和 N-15 同位素，使碎片离子质量容易解析。

二、质谱调谐常见问题
1、调谐无法通过时如何处理？
答：
（1）首先确认真空启动时间及真空度是否合适；
（2）进行自动调谐前需在峰检测窗口确认系统是否漏气；
（3）在工具栏中选择新建调谐文件，在调谐条件窗口中选择“初始化”，然后进行调谐；
（4）调谐无法通过时，是否显示灯丝已经耗尽的错误信息，如果显示，请更换灯丝后再进行调谐；
（5）检查灯丝、离子源的安装位置是否正确；
（6）检查离子源是否污染，长时间未进行清洗的话清洗后再进行调谐；
（7）仪器使用年限较长的情况下，检查PFTBA的剩余量是否过少，少于样品瓶的20%时要加入标准品后再调谐；
（8）检查毛细管柱进入进口的长度与标尺是否一致；
（9）如果还无法通过，就找工程师吧！

2、如何降低水分和氮气？
答：
继续抽真空，水分很快就能降下来，但是氮气很难降下来，这时就要用土办法了，打开气相色谱后面的盖板，用专用扳手拧开进气口。让管路中的载气自然吹扫大概20min后，又拧紧进气口螺帽，现在开始抽真空，大概抽真空1h，再进行调谐，水分和氮气均达到要求！

3、如何判断真空系统漏气及解决办法？
答：
（1）如果在峰检测窗口m/z 28强度 与m/z 18强度的比值大于2就有漏气可能，进一步判断m/z 28强度和m/z 69强度之比小于2则不漏气，若大于2则有可能漏气。
（2）确认真空启动时间，一般情况下启动2小时后真空会达到稳定状态，如果启动时间小于1小时，氮气峰会略高。
（3）确认系统是否存在假漏气。

A. 刚更换气瓶或者气路过滤器，载气管路中会混入空气，会使氮气峰偏高，可通过加大流量吹扫然后再检查。

B.如果载气管路中安装了氦气过滤器，使用一段时间后过滤器会产生饱和而放出氮气，也会造成氮气峰略高，建议更换新的过滤器。

C.氦气纯度不够，含有氮气时，也会类似假象。
（4）进过以上判断，已然漏气，可能的情况是：
A.色谱柱两端的螺母是否紧固，新安装的Vesple压环需要升温至200-250℃保持10-30分钟，降温后重新紧固才可以完全密封。

B.检查进样垫是否超过使用次数，进样口螺母是否拧紧。
C.检查进样口衬管O型密封圈是否破损，衬管螺母是否拧紧。
D.如果真空腔门的密封垫上沾有灰尘，也会造成系统漏气，关闭真空后清理密封垫，再检查漏气情况。

4、真空无法启动如何解决？
答：
（1）检查仪器电源、工作站和仪器的连接是否正常，确认系统处于受控状态。
（2）低真空无法启动时，检查机械泵和主机的连接线是否正常；
（3）检查色谱柱和MS的连接是否正常，柱子是否有断裂；
（4）检查色谱柱流量是否过大，尤其是0.53mm（ID），流量不要超过15ml/min；
（5）检查色谱柱和MS的连接是否正常，柱子是否有断裂；
（6）检查色谱柱流量是否过大，尤其是0.53mm（ID），流量不要超过15ml/min；
（7）检查真空腔门密封圈是否完好，门是否拧紧。

三、质谱调谐常见故障
故障现象一：
调谐参数改变时, 调谐峰强度的变化滞后产生故障的可能原因及排除方法：
a.离子源被污染，排除方法是对离子源依次用甲醇、丙酮超声清洗各15min；
b.预四级杆被污染，排除方法是对预四级杆依次用甲醇、丙酮超声清洗各15min；c.离子源部件未安装到位，电路未接通，排除方法是将离子源拆下，重新安装。

故障现象二：
调谐质谱仪时，需要过高的离子能量和推斥电压产生故障的可能原因及排除方法：
a.高离子能量过高是由于离子源被污染，推斥电压过高是预四级杆、四级杆被污染，排除方法是对离子源、预四级杆、四级杆依次用甲醇、丙酮超声清洗各15min及保养维护；
b. 质谱仪调谐未达到最佳状态，排除方法是重新调谐质谱仪。

故障现象三：
调谐参数改变时，仪器响应不明显产生故障的可能原因及排除方法：离子源短路或电路未接通，排除方法是取出离子源, 用万用表测量各部件间的电路连接是否正常。

故障现象四：
调谐峰的形状不好，有肩峰产生故障的可能原因及排除方法：
a.质谱仪调谐未达到最佳状态，排除方法是重新调谐质谱仪；
b.离子源被污染，排除方法是对离子源依次用甲醇、丙酮超声清洗各15min；c.分析器有缺陷或损坏，排除方法是检查分析器外观是否有缺陷或损坏。

故障现象五：
调谐时，无参考峰出现产生故障的可能原因及排除方法：
a.参考标样全氟只丁氨瓶中无参考标样，排除方法是添加参考标样全氟砚丁氨于质谱仪内置的参考样瓶中；
b.参考标样的管路被堵塞，排除方法是拆下管路，用丙酮超声清洗；c.空气泄漏，排除方法是检查空气峰m/z 28的高度，若大于10%氦气峰m/z 4的高度，表明有空气泄漏，用注射器将丙酮滴在各接口处，通过观察丙酮的分子离子峰m/z58的强度变化, 进一步查明泄漏的确切位置。

故障现象六：
出现不规则、粗糙的调谐峰产生故障的可能原因及排除方法：
a. 离子源被污染，排除方法是对离子源依次用甲醇、丙酮超声清洗各15min；
b. 灯丝老化，排除方法是更换灯丝；
c.质谱仪调谐未达到最佳状态，排除方法是重新调谐质谱仪。

故障现象七：
m/z 18、28、32峰大于10%氦气峰m/z 4产生故障的可能原因及排除方法：
a. 空气泄漏，排除方法是检漏，检查柱子的连接情况；
b. 氦气即将用尽, 气瓶内杂质富集，排除方法是更换载气瓶并安装脱气装置；
c. 新近清洗的离子源未烘干，排除方法是设置250℃的离子源温度烘烤离子源；
d. 柱子被污染，排除方法是老化柱子。

故障现象八：
灯丝状态良好时，无离子产生产生故障的可能原因及排除方法：a. 离子源需要重新校准，排除方法是利用校准工具重新校准离子源；b. 空气泄漏严重，排除方法是检漏并紧固各连接处。

故障现象九：
调谐质谱仪时, 高质量峰m/z 502、614不显示产生故障的可能原因及排除方法：预四级杆短路，排除方法是将预四级杆拆下, 用氦气或氮气吹干。

小结
调谐是最开始也是最重要的一步，调谐做好了才能对检测结果有所保证，而且从调谐的数据也能及时发现仪器是否需要维护和保养之类的，所以说连贯的调谐报告对仪器的维护及样品检测是至关重要的，调谐报告一般都是以日期命名，自动保存，碰到改动比较大的调谐报告，还是希望大家打印出来用文件袋保存！