CDE: 为什么参比的杂质谱跟别人的不一样

王中泰

CDE: 为什么参比的杂质谱跟别人的不一样

CDE: 杂质的结构是否正确的答复，多个来源的杂质HPLC定位都一致，法定方法也能重现相对保留时间，杂质由原料药引入的假设也成立
但是CDE不认可，依然认为实物是错的！理由是同样的参比制剂，你检出了杂质A，而其他申请人没有检出杂质A，为什么?

为了证明杂质A没买错，第一反应是计划制备杂质看下氢谱(本想对比质谱二级碎片，第三方老师的意见是质谱无法识别手性中心)，如果核磁数据不一样，就是异构体，那就真的买错杂质了。想到这，感觉这个项目要砸在手上了，头皮发麻

一个猜想。杂质由原料药引入的假设也成立，即合成工艺中主成分水解后与甲醇反应生成杂质A，那么流动相含有甲醇，杂质A在检测过程中是不是也可以产生？

一个细节。杂质A的含量约0.2%，照搬USP方法（流动相和稀释剂都没有甲醇），微调溶液配制把供试品浓度稀释100倍，见下图，详见CDE: 杂质的结构是否正确一文。降低浓度虽然牺牲了灵敏度，可是杂质A的信号不可能一点都没有，隐隐地佐证上述猜想



为了进一步证明猜想的成立，要优化USP方法(优化原因:在高浓度的供试品溶液下，主峰与杂质A重叠)，参考甲醇与四氢呋喃的选择性一文，在USP方法基础上加入四氢呋喃，见下图，加标供试品溶液中主峰与杂质A达基线分离，供试品中杂质A未检出！


由上述可知，使用不含甲醇的分析方法，样品未检出杂质A

有关物质分析方法，溶剂不含甲醇，甲醇来自流动相，也就是杂质A在色谱柱中反应生成的。类似结构的同类药物未出现此种情况，只能说，这个药物的反应活性很高

模拟杂质A反应条件: 根据流动相比例、柱温和保留时间，确定了甲醇用量、反应温度和反应时间

在供试品溶液中加入甲醇，水浴xx时间，使用不含甲醇的分析方法检测，可检出0.2%的杂质A，杂质A含量可重现

庆幸是未检出，不确定电话发补给不给再次省所复核机会

如果真检出，又没有复核机会，怎么办？

在制剂内控标准或原料药标准中控制杂质A

小结。降解杂质的结构只是主成分接了一个甲基，流动相或稀释剂中含有甲醇，警惕检测结果有可能是假的