“检测方法验证系列：检出限的验证——基础

王中泰

“检测方法验证系列：检出限的验证——基础

方法验证是实验室最基础的工作之一，经常有人问。这次整理汇总一下。

方法验证中，检出限的验证较为复杂，也是最常验证的参数，且验证的方法也有多种，所以先说检出限的验证。本次先介绍一下基础内容，后面会依次介绍检出限的各种验证方法。

一、需要评估检出限（LOD）和定量限（LOQ）的情况

通常情况下，只有当目标分析物的含量在接近于“零”的时候才需要确定方法的检出限（LOD)或定量限（LOQ）。当分析物浓度远大于LOQ时，没有必要评估方法的LOD和LOQ。一般我们在做方法验证时，如果方法本身就有检出限，则我们需要对检出限进行验证，看实验室条件下是否能达到方法的检出限。

对于那些浓度接近于LOD与LOQ的痕量和超痕量检测，并且报告为“未检出”时，或需要利用检出限或定量限进行风险评估或法规决策时，实验室应确定LOD和LOQ。也就是，我们产品检测是未检出时，反而要求我们注意，这个“未检出”对应的浓度值到底是多少，我们实验室“未检出”对应的浓度跟其他实验室对应的浓度值是否一致。不要出现我们实验室检测结果是未检出，在其他实验室检出了的情况。

二、方法定了，检出限就定了吗？

不同样品用同一个方法检测，它的检出限可能是不一样的。所以，不同的基质（不同样品种类）可能需要分别评估LOD和LOQ。

三、检出限的定义

1. ISO/IEC 指南99:2007

检出限（limit of detection；LOD）：由给定测量程序获得的测得的量值，其对物质中不存在某种成分的误判概率为p，对物质中存在某种成分的误判概率为α。

注：国际理论化学和应用化学联合会（IUPAC）推荐α和β的默认值为0.05。

2. GB/T 32467-2015 《化学分析方法验证确认和内部质量控制 术语及定义》

检出限（limit of detection；LOD）样品中可被(定性)检测，但并不需要准确定量的最低含量(或浓度)，是在一定置信水平下，从统计学上与空白样品区分的最低浓度水平（或含量）。

四、检出限的分类

对于多数现代的分析方法来说，检出限（LOD）可分为两个部分：仪器检出限（InstrumentalDetection Limit,IDL）和方法检出限（Method Detection Limit,MDL）。

a) 仪器检出限(IDL)：为用仪器可靠地将目标分析物信号从背景(噪音)中识别出来时分析物的最低浓度或量，该值表示为仪器检出限（IDL）。随着仪器灵敏度的增加，仪器噪音也会降低，相应IDL也降低。

b) 方法检出限（MDL)：为用特定方法可靠地将分析物测定信号从特定基质背景中识别或区分出来时分析物的最低浓度或量。即MDL就是用该方法测定出大于相关不确定度的最低值。确定MDL时，应考虑到所有基质的干扰。

因为一个检测方法，在前处理过程中有可能对样品进行浓缩，也有可能对样品进行稀释，并且，有的方法的基质效应比较大，这都会导致仪器检出限和方法检出限不一致。我们在日常使用时，更多的是出具方法的检出限，所以，做方法验证的时候，验证的也是方法检出限。

五、注意

方法的检出限(LOD)不宜与仪器最低响应值相混淆。使用信噪比可用来考察仪器性能但不适用于评估方法的检出限（LOD）。如果使用信噪比法评估方法检出限，需要注意使用样品加标，而不是直接使用标准物质。

六、检出限验证的方法有哪些？

检出限验证的方法有很多，例如：空白标准偏差法、目视评价法、校准方程法、信噪比法等。

其中，

信噪比法，适用于光谱法、色谱法、质谱法等的验证；

空白标准偏差法，适用于空白样品非零响应值的方法验证；

校准方程估算法，适用于仪器法的验证；

逐级稀释法，适用于所有方法的验证。

后面会逐一介绍各种检出限的验证方法，欢迎继续阅读。