抗生素当今食品危害甚重！四环素牙您得了吗？

zxqbiopharm

四环素检测试剂

酶标免疫分析定量检测四环素族抗菌素残留试剂盒。德国拜发R-Biopharm公司制造。（中文翻译件仅供参考，以试剂盒内附的英文原件为准）。RIDASCREEN Tetracyclin（产品编号R3501） 简介

竞争酶标免疫法定量测定牛奶及肉类中的四环素族抗菌素残留。试剂盒中包括了所有检测用的试剂。该试剂盒有96个试验孔包括标准试验，如果进行定量分析，必须有微孔板酶标仪。

检测下限四环素，金霉素，咪诺四环素及吡咯烷甲四环素等检测下限         牛奶中                         1.5 ppb         蜂产品                          15ppb         肉类中                           6ppb 土霉素检测下限         牛奶中                          15ppb         蜂产品                         150ppb         肉类中                          60 ppb 强力霉素检测下限         牛奶中                          30ppb         蜂产品                         300ppb         肉类中                         120ppb 回收率         牛奶中                       大约90+17%         蜂产品                       大约95+16%         肉类中                      大约100+15% 交叉反应         四环素                          100%         金霉素                           100%         咪诺四环素                       125%         吡咯烷甲四环素                   110%         脱甲金霉素(脱甲四环素)           35%         土霉素                            10%         强力霉素                           5%1.  用途RIDASCREENTetracyclin竞争酶标免疫法定量测定牛奶及肉类中的四环素族抗菌素残留。 2.     概要在欧盟第675/92号令中（出台于1992年3月18日）已经初步规定了，在肌肉及牛奶中的四环素族化合物的总量不得超过100ppb，在肾脏，肝脏及鸡蛋中分别不得超过600，300及200ppb。在以前，四环素族抗菌素残留的检测是用高压液相色谱来进行的， HPLC方法的缺点是制备样品要耗费大量时间，并且需要昂贵的实验室设备。使用RIDASCREENTetracyclin试剂盒测定肉中的四环素族抗菌素残留快速准确并且测定牛奶时不需样品制备。    试剂盒中含有所有的试剂，3小时内可以完成96个孔的试验（一块酶标板）。 3.     测定原理测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有结合到蛋白上的四环素（固相）。四环素抗体，四环素标准或样品溶液被加入，游离的四环素与固相四环素竞争四环素抗体，没有连接的四环素抗体在洗涤步骤中被除去。加入酶标记物（过氧化物酶标记的第二抗体，针对四环素抗体）。然后在洗涤步骤除去未结合的酶标记物。将酶基质（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色。在450nm处测量（可选择大于600nm的波长作为参比波长），吸收光强度与样品中的四环素浓度成反比。 4.     提供的试剂每一个盒中的试剂足够进行96个测量（包括标准分析孔），盒中的材料如下1 X 96孔板（12条 X  8孔）包被有四环素蛋白6 X 浓缩标准，1. 3ml/瓶，为四环素水溶液0ppt，500ppt，1500ppt，4500pp，13500ppt，40500ppt1 X  四环素抗体（6ml）………….…….….……….…..黑色帽1 X  过氧化物酶标记物（10ml）……………….…….….红色帽1 X  基质（7ml）含有过氧化尿素…….………………..绿色帽1 X  发色剂（7ml）四甲基联苯胺……………….…..…..蓝色帽1 X  反应停止液1M硫酸….…………….…….….……….黄色帽1 X  缓冲液 1 ，50ml标准及样品稀释用缓冲液1 X  缓冲液 2 ，10ml测定牛奶样品的标准稀释用缓冲液 2.     需要的材料但盒中不提供5.1设备----微孔板酶标仪（450nm）----离心机----旋转蒸发器----混合器----超声波浴槽（蜂蜜样品）----25ul， 50ul， 100ul， 450ul，1000ul微量可调加样器5.2 试剂----洗涤缓冲液：PBS-T（含有土温20的磷酸缓冲液盐水）（0.55g  NaH2PO4 XH2O+ 2.85g Na2HPO4X 2H2O+9gNaCl + 1ml Tween20，加入蒸馏水至1000ml）；pH 7.2-7.4 肉样品----RIDA C18 柱 （ Art No：R2002 ）----甲醇----Mcllvain-buffer：12.9g 一水柠檬酸，10.9g Na2HPO4 ， 37.2g EDTA钠盐，调pH3.8，加蒸馏水至1000ml----洗脱液：含20mM草酸的甲醇（=1.8g/l） 蜂蜜样品----20mM PBS缓冲液（0.55g  NaH2PO4 XH2O； 2.85g Na2HPO4 X2H2O+9gNaCl，用NaOH调pH值为7.4 加入蒸馏水至1000ml） 6. 操作者应该注意之事项----反应停止液为1M硫酸，避免接触皮肤----不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度的降低----不要交换使用不同批号的盒中试剂 7. 储存条件----保存试剂盒于2-80C。不要冷冻。----无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下----将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂    一起重新密封 8. 试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.6个单位（A450nm<0.6）时，表示试剂可能变质。 9. 样品处理 样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存9.1 牛奶样品9.1.1脱脂牛奶----脱脂牛奶用buffer 1 以1：10稀释 （50ul牛奶+450ulbuffer1）----直接进行测定 9.1.2脂肪奶----脂肪奶应当离心10分钟 / 3000 g，150C 注意：如果没有冷冻离心机请预先冷却后再离心，撇去脂肪后用buffer 1 以1：10稀释（50ul牛奶+450ul buffer 1）然后进行测定。 9.2 蜂产品----称1g 蜂蜜于带锣口盖的瓶中（80ml）----用20mM PBS 缓冲液（pH7.4）50倍稀释（1+49）----超声波均质5分钟----强烈混合2分钟（摇动）----加样之前混均（颠倒振荡）----取50ul分析 9.3肉组织----5g粉碎的样品与25ml Mcllvain-buffer 混合30分钟----10 0C离心10分钟 3500 X g，保存上清液----沉淀物重复提取一次，将两次的提取液合二为一（50ml）用折叠滤纸过滤----取5ml滤液用RIDA C18柱按以下步骤纯化----用4ml甲醇（100%）洗涤柱子----用3ml 蒸馏水洗涤柱子----取5ml滤液样品进柱----用3ml 蒸馏水洗涤柱子----小心的压出所有的液体----用2ml甲醇/草酸洗脱样品,流速为15滴/分钟----洗脱液用样品稀释缓冲液以1：10稀释，取50ul 进行分析 9.4 尿液、血清----20mM PBS 缓冲液（pH7.4）以20倍稀释尿液（1ml尿液+19ml缓冲液）----如果尿液不清亮，必须离心（3000g/10分钟）或滤纸过滤后再稀释----取50ul分析稀释倍数为20四环素、金霉素的检测下限1ppb               定量下限3ppb土霉素的检测下限10ppb         定量下限30ppb 回收率牛奶中添加四环素5ppb，土霉素100ppb水平       90+17%蜂产品中                                  大约95+16%肉类中                                   大约100+15%