最新硝基呋喃代谢物快速检测方法

qihang321

基呋喃类代谢物快速检测说明书

【检测原理】 样品中的硝基呋喃类代谢物AOZ、SEM等经过提取后与芳香醛反应衍生化生成腙类化合物，该类化合物与金属离子形成的配位体在紫外灯照射下具有蓝绿色荧光。依此性质建立硝基呋喃代谢物荧光现场快速筛查法。硝基呋喃代谢物与新型衍生化试剂反应速度快，生成产物稳定，用反相萃取柱富集净化，再用较少的试剂洗脱，可得到较好的浓缩和净化。

【检测范围】 新鲜鱼、虾等水产品的肌肉组织

【技术指标】 检测下限：1.0μg/kg

【操作步骤】

1）提取：准确称取已搅碎的样品10.0g于50mL离心管中，依次加入提取剂1及提取剂2(液体20.0mL) ，振摇或旋涡混合1min后于35~40℃条件下超声15min取出；过滤或离心，取上清液10mL于50mL离心管；

﹡过滤：取一块脱脂棉，塞住漏斗上颈口，加入3mL净化剂润洗脱脂棉，用一次性吸管吸取上清液10mL过滤;

﹡离心：4000r/min离心5分钟后取上清液10mL；

2）衍生化：取2ml激活剂完全溶解衍生化试剂3备用；向“1”中收集的滤液中依次加入0.5mL衍生化试剂1(移液枪取)、0.8mL衍生化试剂2(移液枪取)，摇匀后再加入0.1mL衍生化试剂3(移液枪取)、0.5mL衍生化试剂4 (移液枪取)，摇匀后于35~40℃条件下超声衍生化30min；冷却至室温待过柱；

3）过柱：取固相萃取柱一支，依次加入3mL激活剂、2mL蒸馏水激活柱子后，加入全部衍生化样液【如果衍生化样液有白色悬浮物，静置沉淀或离心取上清液过柱】，以2～3mL/min速度过柱，弃去流出液并挤干；加入2mL洗涤剂弃去流出液并挤干；再加入0.6mL洗脱剂（移液枪取）洗脱，5mL离心管收集洗脱液；

4）萃取：取6ml蒸馏水溶解萃取剂1一瓶备用（萃取剂1不能完全溶解）；

Ø
向收集的洗脱液中加入1ml萃取剂1的上清液、1mL萃取剂3，振摇30秒，静置3min分层，弃去下层液体；

Ø
加入1ml萃取剂2、1mL萃取剂3，剧烈振摇30秒，静置4min分层，弃去上层；

Ø
再加入2mL萃取剂3，剧烈振摇30秒，静置4min分层，弃去上层液体；

Ø
再加入2mL萃取剂3，剧烈振摇30秒，静置5min分层，待观察。

5）观察判断：用干净的一次性吸管吸取0.7mL下层（切忌取到上层）液体到点滴板的一个孔上, 加入3滴定性试剂混匀，同时用另一支吸管吸取0.7mL对照液（对照液用洗涤剂1：1稀释）到点滴板的另一个孔上；将点滴板放入硝代速测检测仪中对照观察，荧光强度高于对照液的荧光强度则样品中含有硝基呋喃代谢物大于1.0μg/kg；荧光强度低于对照液的荧光强度则样品中硝基呋喃代谢物的含量则小于1.0μg/kg。

【注意事项】 过柱速度不能太快，萃取时振摇剧烈，静置时间一定要够长

1.
衍生化试剂、洗涤、洗脱和萃取剂2在用前要先摇匀；

2.
点滴板在使用前，先检查有无荧光干扰；

3.
检测的样品必须是新鲜或冷冻无变质的；

4.
搅碎后的样品及提取出来的样液必须当天检测不能隔夜放置；

5.
萃取剂3易挥发用完立即塞紧瓶塞。

名称	数量	名称	数量	名称	数量
提取剂1	10瓶	激活剂	1瓶	检测对照液	1瓶
提取剂2	10瓶	洗涤剂	1瓶	5ml离心管	10个
衍生化试剂1	1瓶	洗脱剂	1瓶	1ml吸管	50支
衍生化试剂2	1瓶	萃取剂1	2瓶	固相萃取柱	10根
衍生化试剂3	1瓶	萃取剂2	2瓶	说明书	1份
衍生化试剂4	1瓶	萃取剂3	1瓶
净化剂	1瓶	定性试剂	1瓶

【试剂盒装箱单】

规格：10样/盒